В статье представлены данные по определению влияния интенсивности развития куриных эмбрионов на накопление экстраэмбриональной жидкости. Разработан приём рационального их отбора для нужд биологической промышленности.
Птицеводство вносит весомый вклад в обеспечение продовольственной безопасности страны. Так, производство яиц в 2010 году составило 40,7 млрд. штук, что превысило уровень 2009 года на 1,3 млрд. (на 4%), а мяса птицы 2890 тыс. т, что больше на 290 тыс. т (на 13,5%).
Высокий прирост обеспечивается благодаря использованию высокопродуктивных кроссов, сбалансированному кормлению и оптимальным условиям содержания птицы. Однако по-прежнему актуальной остаётся проблема ветеринарно-санитарного и экологического благополучия птицеводческих предприятий.
Эпизоотическая обстановка в птицеводстве России по ряду заболеваний сложная и нестабильная. Так, показатели сохранности взрослой птицы в последние годы находились на уровне 95,2%, молодняка - 93 процента. Падёж птицы связан не только с нарушениями технологии выращивания и содержания, но и с импортом в Россию племенной птицеводческой продукции.
Вакцинация птицы от инфекционных болезней является общепризнанным способом защиты, развитие которого привело к необходимости разработки методов массового получения вирусного сырья. В течение многих лет заражение животных оставалось единственным методом культивирования вирусов.
Важным шагом в разработке вирусных вакцин стало использование в биологической промышленности с конца 30-х годов XX века развивающихся эмбрионов кур (РЭК).
Это позволило расширить спектр культивируемых в лабораторных условиях вирусов, так как они имеют ряд преимуществ перед лабораторными животными: скорлупа и подскорлупная оболочка надёжно защищают от бактериального заражения внешней среды, недостаточная развитость иммунной системы обеспечивает высокую чувствительность к вирусам; куриные эмбрионы - легкодоступный объект, не требующий ухода и кормления.
Эта технология не потеряла своей актуальности и сегодня из-за большой производительности и высокого накопления ряда вирусов. Её с успехом применяют для изготовления препаратов против ряда заболеваний человека и животных.
Большинство вакцин, используемых в птицеводстве (против ньюкаслской болезни, инфекционной бурсальной болезни, инфекционного бронхита кур, пневмовирусной инфекции, инфекционного ларинготрахеита и др.), являются авинизированными (эмбриональными).
Вместе с тем к куриным эмбрионам в качестве вируссодержащего материала предъявляются следующие требования: они должны быть получены из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням, скорлупа непигментированная, чистая, а возраст эмбриона соответствует избранному методу заражения.
Процесс инкубации яиц организуется в соответствии с принятыми рекомендациями, прижизненную оценку развития эмбрионов проводят в контрольные дни путём просвечивания на овоскопе.
Куриные эмбрионы имеют большие вариации в степени развития на протяжении всего периода инкубации. Известен способ оценки развития куриного зародыша белоскорлупных яиц в первые сутки инкубации, предложенный профессором М.В. Орловым. Автор оценивал их по времени появления бластодиска путём овоскопирования в первые часы после начала инкубации. При этом отмечалось, что те зародыши, в которых бластодиск был виден раньше, в дальнейшем развивались более интенсивно.
Однако этот способ не нашёл широкого практического применения, поскольку требует частого изъятия яиц из инкубатора в первые часы инкубации и не учитывает того фактора, что процесс деления зародышевых листков начинается сразу же после оплодотворения, то есть ещё в яйцеводе курицы.
Исходя из вышеизложенного, основная задача предлагаемого способа отбора куриных эмбрионов для биологической промышленности - получение максимального количества экстраэмбриональной (аллантоисной и амниотической) жидкости для производства вакцин.
Исследования были проведены на курах породы белый леггорн материнской линии, материнской родительской формы СП 9 кросса СП 789 в ЭПХ ВНИТИП. Племенные яйца для опытов использовали от кур, содержание и кормление которых соответствовало требованиям для получения полноценных инкубационных яиц.
Для опыта отобрано 300 яиц. Оценка их и режим инкубации соответствовали методическим рекомендациям ВНИТИП для яичных кур.
Учёт интенсивности развития эмбриона осуществляли через 18-19 и 63-64 ч после начала инкубации путём измерения диаметра бластодиска и сосудистого поля желточного мешка при помощи штангенциркуля с точностью до 0,1 мм без вскрытия скорлупы.
На основании ранжирования изучаемых признаков эмбрионы распределили по интенсивности развития на следующие группы: интенсивные, средние, медленные. Яйца для опытов во всех трёх группах выравнивали по массе и индексу формы.
В таблице 1 представлены данные о развитии эмбрионов на ранних стадиях онтогенеза по группам и выборке в целом.
Показатели, мм | Группа | В целом по исследуемым эмбрионам | |||||||
Интенсивные | Средние | Медленные | |||||||
М | Сv, % | М | Сv, % | М | Сv, % | М | Сv, % | ||
Диаметр бластодиска через 18-19 ч после начала инкубации | 7,7 | 20,1 | 8,0 | 11,0 | 8,1 | 22,9 | 7,9 | 19,0 | |
Диаметр сосудистого поля желточного мешка через 63-64 ч после начала инкубации | 22,4 | 6,1 | 19,4 | 3,1 | 16,2 | 10,3 | 19,3 | 15,1 | |
Разница диаметров зародыша куриного эмбриона | 14,7 | 9,4 | 11,4 | 6,2 | 8,1 | 15,7 | 11,4 | 26,5 | |
Как видно из таблицы 1, диаметр бластодиска в первой группе был меньше, чем во второй и третьей, на 0,3 и 0,4 мм соответственно. Однако эта разница незначительна и недостоверна. Эмбрионы первой группы имели достоверно (Р < 0,001) больший размер сосудистого поля по сравнению со второй на 3 мм (1 3,4%) и по сравнению с третьей на 6,2 мм (27,7%). Если сравнить значения этого показателя со средними данными по опыту, то разница составит 3,1 мм (13,8%). Разница диаметров зародыша куриного эмбриона была достоверно (Р < 0,001) больше в первой группе, чем во второй и третьей, на 3,3 (22,5%) и 6,6 мм (44,9%) соответственно.
Таким образом, эмбрионы первой группы интенсивнее развивались в период с 18-19 и 63-64 ч инкубации.
На 7-е сутки инкубации проводили экспериментальное заражение РЭК (по 30 эмбрионов от каждой группы) на базе опытного производства ВНИТИБП Россельхозакадемии путём введения в аллантоисную полость эмбриона вакцинного штамма «Ла-Сота» вируса ньюкаслской болезни (ВНБ) с последующей инкубацией при температуре 37±1°С в течение 72 ч в соответствии с нормативной документацией.
Сбор экстраэмбриональной жидкости осуществляли отдельно по группам с разной интенсивностью эмбрионального развития. Данные об общих её объёмах по группам интенсивности и её средних от одного эмбриона представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Группа эмбрионов | Объем экстраэмбриональной жидкости, мл | |
Общий | От одного эмбриона | |
Интенсивные | 323 | 10,76 |
Средние | 316 | 10,53 |
Медленные | 285 | 9,5 |
По исследуемым эмбрионам | В целом 924 | В среднем 10,27 |
Анализ выхода экстраэмбриональной жидкости показал, что общий её объём, полученный от интенсивно развивающихся эмбрионов, больше по сравнению с другими группами.
При сравнении среднего объёма от одного эмбриона по первой группе и по общей выборке отмечено, что выход экстраэмбриональной жидкости от интенсивно развивающегося эмбриона больше на 4,74 процента. Это подтвердило предположение о том, что интенсивно развивающиеся эмбрионы эффективнее используют составные части яйца (белок и желток) для формирования плодных оболочек.
Инфекционную активность ВНБ (Іg ЭИД50/см3) в экстраэмбриональной жидкости РЭК определяли по 50%-ному инфекционному действию титрованием на 9-10-суточных эмбрионах по общепринятой методике, по результатам капельной РГА. Титр рассчитывали по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина.
Наиболее высокая инфекционная активность вируса отмечена от интенсивно развивающихся эмбрионов (табл. 3).
Таблица 3.
Показатели | Группы эмбрионов | ||
Интенсивные | Средние | Медленные | |
Титр вируса, lg ЭИД50/см3 | 9,3 | 8,7 | 8,6 |
Повышение титра вируса, по-видимому, связано с высокой пролиферативной способностью клеток интенсивно развивающегося эмбриона. Результаты исследования показали преимущество способа отбора куриных эмбрионов для нужд биологической промышленности по интенсивности эмбрионального развития по сравнению с другими методами.
Увеличение выхода экстраэмбриональной жидкости РЭК - ценнейшего сырья для биотехнологической промышленности - позволит существенно сократить количество эмбрионов, используемых для получения вируссодержащего материала, что, в свою очередь, приведёт к удешевлению вакцинах препаратов и повышению их конкурентоспособности.
