Портал промышленного птицеводства
Эл № ФС77-48923 от 12.03.12г. Роскомнадзор

Ветеринария домашней птицы | Новые подходы к диагностике ассоциированных инфекций у кур

С. Федотов, М.Черных, Е. Капитонов, Алтайский ГАУ

Проблема диагностики ассоциированных инфекций в промышленном птицеводстве приобрела особую значимость в связи с изменением формы инфекционной патологии и появлением экзотических заболеваний.

В последние годы наблюдается увеличение удельного веса инфекций, вызванных ассоциациями условно-патогенных микроорганизмов. Они характеризуются выраженным клиническим полиморфизмом, связанным с одновременным воздействием нескольких аген­тов, что затрудняет интерпретацию результатов лабораторных исследований, так как каждая из составляющих микст-культур обладает рядом признаков, сочетание которых может определять патогенный потенциал возбудителей в целом.

Установлено, что такие заболевания препятствуют выявлению основного этиологического агента, вызывающего инфекционный процесс, и затрудняют проведение этиотропной противоинфекционной терапии. Также не полностью расшифрована структура самих мик­робных ассоциаций, не в достаточной мере выявлена роль некоторых составляющих микроорганизмов в их прямом или опосредованном влиянии на организм птицы.

В то же время межбактериальные взаимодействия как один из механизмов формирования ассоциаций микроорганизмов и проявления их патогенных свойств изучены недостаточно в связи с несовершенством методов диагностики.

Проводя вскрытие больной птицы на яичных птицефабриках («Молодёжная» Первомайского района и «Павловская» Павловского района), мы находили деформированные фолликулы, содержимое которых было разжижено или уплотнено. В их оболочках отмечали точечные кровоизлияния. Однако рядом с патологическими наблюдались и нормально сохранившиеся фолликулы. Клиническое проявление фолликулита яичника у кур-несушек сопровождалось прекращением яйценоскости.

Анализируя биохимические изменения в крови клинически больной птицы, данные патолого-анатомического вскрытия и результаты морфологических исследований, можно предположить, что характер патоморфологических изменений структуры фолликулов яичника указывает на выраженное цитотоксическое действие возбудителя инфекции. Наблюдается усиление лимфоцитарной инфильтрации фолликулярной и текальной оболочек, увеличение количества форменных элементов крови и тканевых базофилов.

У кур с патолого-анатомическими признаками фолликулита яичник был контаминирован стафилококками, кишечной палочкой, стрептококками и протеем во все сроки наблюдений. Максимальное число такой птицы установлено в период активной яйценоскости. Микрофлора преимущественно была в форме ассоциаций, при этом в большей степени выделялись организмы с высокой степенью вирулентности, такие, как золотистый стафилококк и гемолитические штаммы эшерихий.

Так, из фолликулов яичников кур в возрасте 150-250 дней стафилококки отмечены чаще, чем другие микроорганизмы, — в 56 случаях (63,64%). В том числе с кишечной палочкой — в 14 (15,92%); с кишечной палочкой и стрептококком — в 8 (9,09%); со стрептококком — в 1 (1,14%); с протеем — в 7 (7,95%); с протеем и кишечной палочкой — в 4 (4,55%) и в 22 (25,0%) — в виде монокультур.

Высокой степенью высеваемости характеризовалась и кишечная палочка (42,05% случаев), особенно со стафилококками (15,92% случаев). Число птицы, у которой из содержимого фолликулов выделяли ассоциации кишечной палочки со стрептококком, составило 3 (3,41%) головы. В 2 (2,27%) случаях она наблюдалась с протеем, в 8 (9,09%) — со стафилококками и стрептококками, в 10(11,36%) — в виде монокультур.

В большинстве случаев стрептококки и протеи из содержимого фолликулов в виде монокультур изолировали только от трупного материала взрослых кур, а стафилококки и кишечную палочку высевали как из трупов, так и вынужденно убитой птицы.

При микробиологической диагностике репродуктивных органов у клинически здоровых кур стафилококки, энтерококки и др. не высевались. Фолликулы яичников были округлой формы различной величины. Их содержимое жёлтого цвета, и консистенция средней густоты.

Заболевания яичников у птицы имеют полимикробную этиологию, ведущая роль в которой принадлежит условно-патогенным микроорганизмам, преимущественно в ассоциациях факультативно-анаэробной и анаэробной микрофлоры. Наши данные подтверждаются экспериментами Batra C.L., Singh В., Crewal C.S., SodhiS.S. (1982).

Микробиологические исследования показали, что на птицефабриках удаётся обнаружить распространение штаммов стафилококков следующих видов: St. aureus (72,7%), St. saprophyticus (13,6%) и St.epidermidis (13,6%). При проведении дальнейшей типизации St. aureus выявили различные биологические варианты. Так, от кур с клиникой фолликулита яичника выделяли биовары hominis, gallinae и А/В. Кроме них на «Павловской» птицефабрике высеян биовар C/D, а на «Молодёжной» — canis. Тем не менее наблюдалась положительная корреляционная связь между биологическими вариантами стафилококков вида St. aureus, выделенных на обеих птицефабриках (г=0,79).

В результате серологической типизации 78 энтеропатогенных культур 87% из них отнесены к сероварам: 01, 02, 078, 09, 055, OIII и OI4I. При этом к серотипу 02 мы отнесли 65,5% культур, к 078 — I 3,3, к 01 — 11,6%, к 09, OIII, OI4I — по одной культуре E.coli, к 055 — 2 культуры. Таким образом, наиболее распространенными и вирулентными для лабораторных животных были культуры эшерихий сероваров 01, 02, 078.

В процессе исследований выделено три группы стрептококков: b-гемолитические (Str. hemolyticus), вызывающие гемолиз эритроцитов; а-зеленящие (STR. viridans), образующие вокруг колоний зеленую зону гемометаморфоза; негемолитические у-стрептококки (Str. anhemolyticus), не изменяющие эритроциты и не вызывающие гемолиз кровяного агара. Из 32 культур стрептококков, выделенных в динамике заболевания кур, патогенными для белых мышей оказались 14, что составляет 39,64 процента.

Изучая морфологические и культурально-биохимические свойства бактерий из рода протея, выделенных из поражённых фолликулов, провели типизацию. Протея, разлагающего глюкозу (К+Г+) и сахарозу, отнесли к виду мирабильного (Proteus mirabilis), а разлагающего глюкозу (К+Г+), сахарозу и мальтозу — к вульгарному (Proteus vulgaris). Микробы этой группы характеризовались высокой степенью патогенности: 14 (57,33%) из 27 культур оказались патогенными для белых мышей.

Обобщая полученные результаты микробиологических исследований, отмечаем, что из поражённого яичника выделяли стафилококки, представленные St. aureus, St. saprophyticus и St. epidermidis и Е. coli в виде сероваров 01, 02, 078. Реже отмечены стрептококки и Protei vulgaris.

Полученные результаты подтверждаются исследованиями Датского института болезней птиц (Bisgaard M., Dam A., 1981). Они выявили смешанную микрофлору из поражённых половых органов кур в 16 случаях (11%), в то время как неспецифический рост — в 3. Обнаружили 19 различных О-групп кишечной палочки, наиболее часто встречался серотип 02.

В январе-феврале прошлого года было исследовано 600 ослабленных цыплят кросса F-15 в возрасте 1-5 дней. В результате у 1 70 голов выделена Е. coli; у 1 30 — St. aureus и Е. coli; у 60 - St. aureus; у 60 — St. aureus, Citrobacter frendi и Е. coli; у 90 — Citrobacter frendi и E. coli.

При микробиологическом исследовании эмбрионов (1 проба — 5 эмбрионов в возрасте 21 дня) выявлено 1 7 проб Е. coli; 1 3 — St. aureus и Е. coli; 6 — St. aureus; 6 — St. aureus, Citrobacter frendi и Е. coli; 9 — Citrobacter frendi и Е. coli.

Традиционно применяемые таксономические методы идентификации патогенных микроорганизмов на птицефабриках Алтайского края основаны на использовании различных хемотаксономических тестов, таких, как специфическая ферментативная активность, способность метаболизировать сахар или поддерживать рост на средах с селективными добавками.

Сложность стандартизации условий подобных тестов, а также естественная фенотипическая вариабельность, присущая многим микроорганизмам, могут быть причиной неправильной идентификации.

В значительной мере бактериологи продолжают зависеть от морфологических и биохимических критериев при определении микроорганизмов, выделяемых из патологического материала и объектов окружающей среды.

В некоторых случаях идентификация и классификация патогенных микроорганизмов не отвечает запросам ветеринарной практики. Обусловлено это наличием ряда обстоятельств; основные: неудовлетворительная экспрессия фенотипических признаков, прежде всего факторов патогенности у бактерий в различных условиях их культивирования; существование некультивируемых бактерий; способность более чем 20 видов патогенных бактерий переходить в состояние покоя, характеризующееся резко сниженной метаболи­ческой активностью и временной потерей способности к размножению; наличие генетического механизма, осуществляющего постоянное изменение антигенных детерминант в организме-хозяине, что, с одной стороны, помогает возбудителю выживать в макроорганизме, уходя от воздействия иммунного ответа организма-хозяина, а с другой — приводит к неудачам лабораторной диагностики при использовании сероиммунологических методов.

Следует признать, что в лабораторной практике также существуют естественные ограничения при использовании фенотипических методов оценки лекарственной устойчивости возбудителей ассоциированных инфекций.

Дискодиффузный метод определения чувствительности к противомикробным препаратам является доминирующим в практической деятельности ветеринарных лабораторий Алтайского края.

Его основное достоинство — простота в исполнении и экономическая доступность. До настоящего времени он остаётся предпочтительным для большинства лабораторий.

Вместе с тем очевидны его недостатки: метод используют при определении чувствительности к антибиотикам ограниченного числа микроорганизмов; он непригоден, если микроб не образует на поверхности агаризированной питательной среды или гомоген­ный газон определённой плотности, или газон образуется после 24-часовой инкубации бактерий, а грибов — после 48 часов.

Для реализации метода пригоден узкий круг питательных сред, зачастую не предназначенных для роста требовательных микроорганизмов. Зона подавления роста микроба не всегда адекватна его истинной чувствительности к противомикробным средствам и т.д.

Кроме того, результаты хемотаксономических тестов могут быть искажены в связи со снижением активности антимикробных препаратов в процессе длительного культивирования микроорганизмов, поэтому не являются основанием для оценки их чувствительности.

Из представленных примеров видно, что в арсенале современных бактериологических лабо­раторий птицефабрик должны быть методы, позволяющие идентифицировать, классифицировать и дифференцировать патогенные микроорганизмы независимо от формы или состояния.

Помимо традиционных способов определения видовой принадлежности возбудителей ас­социированных инфекций должно уделяться внимание их геномным характеристикам. Это особенно важно для тех микроорганизмов, которые претерпевают адаптивные изменения под воздействием неблагоприятных экологических факторов, антибактериальной терапии, при контакте с больной птицей и продуктами птицеводства.

Методы индикации микроорганизмов должны сочетать быстроту, специфичность, обладать функцией мультиплексности, соответствовать современному уровню развития лабораторного дела.

К таким сегодня относятся ПЦР и секвенирование чувствительности и специфичности, которые превосходят все существующие до настоящего времени хемотаксономические методы, поскольку выявляют гены (нуклеиновые кислоты) возбудителей, а не антигены и антитела.

Применение ПЦР-диагностики для выявления источника возникновения очага инфекции, выделение и изучение возбудителей инфекционных болезней (ассоциированных инфекций) как в течение эпизоотии, так и в межэпизоотический период позволит следить за изменением генетической структуры микроорганизмов, предсказывать появление новых вариантов и создавать адекватные средства защиты и диагностические препараты. Помимо этого она позволяет определять наличие возбудителя в период так называемого «серологического окна», то есть в промежутке между моментом инфицирования организма и появлением антител в количествах, достаточных для определения.

Метод ПЦР обладает рядом преимуществ перед хемотаксономическими методами. К настоящему времени материальная база для его успешного применения достаточно развита. Все её компоненты (приборы, наборы для выделения ДНК, ферменты и т.д.) широко представлены на рынке и становятся доступными по цене. Внедрение его позволит более эффективно проводить лечение и профилактику заболеваний, вызванных ассо­циированными инфекциями.

Статья была опубликована в журнале «Птицеводство», 2010 год.




Просмотров: 1035

Возврат к списку