С. Лыско, кандидат ветеринарных наук, СибНИИП
Высокая микробная контаминация спермы диктует необходимость применения эффективных препаратов для её санации. Кроме условно-патогенной микрофлоры в ней могут содержаться микробы, возбудители инфекционных болезней. Для повышения санитарного качества при искусственном осеменении сперму разбавляют санирующими веществами. Известны следующие способы — введение в среду для её разбавления антибактериальных препаратов: пенициллина и стрептомицина в дозах 30-50 тыс. ед., олеморфоциклина — 5000 ед. на 100 мл разбавителя, гентамицина — 2,5 мкг/мл, канамицина — 31,2 мкг/мл, неомицина — 62,5 мкг/мл; комплексных препаратов — спермосана-3 в дозе 25000-50000 ед./100 мл и полигена — 600 мкг/мл. Однако эти способы санации обладают низкой активностью антибактериальных препаратов, применяемых в отношении микрофлоры, выделенной от птицы. Используемые антибиотики не оказывают действия на микоплазмы, в частности на М. gallisepticum. Петухи без видимых клинических признаков болезни являются источником инфекции для потомства и кур репродуктивного стада. Заражение их микоплазмозом через контаминированную сперму, в том числе и при искусственном осеменении, передача возбудителя через яйцо потомству приводит к широкому распространению инфекции и наносит экономический ущерб птицеводству.
Цель исследования — разработать новый способ санации спермы петухов.
Исследования проводили в Сибирском НИИ птицеводства и экспериментально-племенном хозяйстве института. На первом этапе изучали видовой состав микрофлоры спермы производителей. Получали её методом ручного массажа в стерильные спермоприёмники. В лабораторных условиях проводили бактериологическое исследование, индикацию культур микроорганизмов из спермы осуществляли общепринятыми в микробиологии методами с применением обычных и селективных питательных сред, а также жидкой и плотной питательных сред для культивирования глюкозо-ферментирующих микоплазм. Идентификацию выделенных культур проводили по морфологическим, биохимическим, тинкториальным признакам. Изучили чувствительность к антибактериальным препаратам выделенных из спермы культур методом дисков и серийных разведений, кроме того, активность 18 препаратов из различных фармакологических групп.
На следующем этапе определяли влияние наиболее активных препаратов и их сочетаний на качественные показатели спермы в опытах in vitro. Антибактериальные растворяли в стандартном синтетическом разбавителе и использовали для разведения спермы. Изучили действие различных доз на выживаемость спермиев при температуре 2-4 и 20-24° С. На основании полученных данных подсчитывали показатель абсолютной выживаемости спермиев (S, в ед. и часах). Каждую дозу препарата оценивали по результатам пяти опытов.
Изучили влияние нетоксичных доз средств на подвижность спермиев, рН спермы, определяли общее микробное число в 1 мл разбавленной спермы, коли-титр. Опыты повторяли четыре раза с последующей статистической обработкой данных.
Для оценки оплодотворяющей способности спермы было проведено искусственное осеменение кур с применением в среде для разбавления спермы наиболее эффективного сочетания антибактериальных препаратов в научно-производственных и производственных опытах. В контроле использовали разбавитель без антибиотиков. Осеменение кур проводили разбавленной полиспермой 1 раз в 7 дней, доза — 0,05 см3. Яйца для инкубации собирали в течение 7 дней. Было заложено 6 партий. Перед закладкой определяли качество инкубационных яиц: содержание суммы каротиноидов, витаминов А, В2, Е в желтке, витамина В2 в белке, толщину скорлупы. Помимо оплодотворённости учитывали влияние нового разбавителя на выводимость яиц и вывод цыплят. Оценивали развитие и жизнеспособность полученного молодняка в первые 10 дней выращивания.
При бактериологическом исследовании в сперме петухов обнаружены патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, в том числе М. gallisepticum, E.coli, Staphylococcus spp и др. Антибактериальные препараты, рекомендуемые для санации, малоэффективны в отношении микрофлоры, выделенной из спермы.
На основании результатов чувствительности отобраны наиболее активные антибактериальные препараты и их сочетания с учётом синергизма действия.
Цельная свежеполученная полисперма была оценена как густая — концентрация спермиев 5,4 млрд./мл, подвижность — 7,6 балла. При внесении в синтетическую среду для её разбавления с антибиотиками в дозах до 100 ед./мл показатели абсолютной выживаемости спермиев были меньше контроля на 1,2-8,7% при 2-4°С и на 6,5-7,5% при 20-24° С. Выживаемость по времени (в часах) находилась на одном уровне с контролем. Применение испытуемых антибактериальных препаратов в дозах свыше 100 ед./мл привело к резкому снижению выживаемости спермиев и их гибели уже через 12 и 36 часов (60 ч — в контроле). На основании результатов определены для спермиев оптимальные нетоксичные дозы антибактериальных препаратов.
Подвижность их при добавлении разбавителя с различными средствами составляла 7,5-8,3 балла при норме не менее 7. В контроле, где использовали среду без антибиотиков, подвижность спермиев была на уровне 9 баллов. При бактериологическом исследовании разбавленной спермы определено наиболее эффективное сочетание и доза, позволяющие подавить рост условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Применение этого сочетания для санации спермы при искусственном осеменении кур не оказало отрицательного влияния на её оплодотворяющую способность. Оплодотворённость яиц составила 98 процентов (табл.).
Показатели | Группа | |
Контрольная (без санации спермы) | Опытная (новый способ санации) | |
Выживаемость спермиев при t 2-4 °С: | ||
S, ед. | 445,3 | 406,7 |
час | 60 | 60 |
Выживаемость спермиев при t 2-4 °С: | ||
S, ед. | 20,0 | 18,5 |
час | 3,5 | 3,5 |
Концентрация спермиев, млрд./мл | 3,1 | 3,2 |
Подвижность спермиев, баллов | 8,7 | 9,0 |
рН спермы | 6,8 | 6,8 |
Микрофлора спермы: | ||
ОМЧ в 1 мл спермы | 40,4*103 | - |
коли-титр | 0,001 | - |
Оплодотворенность яиц, % | 90,6 | 92,3 |
Выводимость яиц, % | 87,6 | 88,7 |
Вывод цыплят, % | 79,3 | 81,9 |
Сохранность цыплят за 10 дней выращивания, % | 98,3 | 99,8 |
Среднесуточный прирост в 1-7 дн., г | 9,7 | 10,3 |
Роста микоплазм и другой патогенной и условно-патогенной микрофлоры спермы не было. Не оказано отрицательного влияния и на качество инкубационных яиц. Оплодотворённость и выводимость яиц повысились на 1,7 и 1,1% соответственно, а вывод цыплят — на 2,6 процента. Наблюдалось положительное действие на развитие полученного потомства, увеличились сохранность на 0,9% за первые 10 дней выращивания и интенсивность прироста живой массы на 6,2 процента.
Разработанный способ санации спермы петухов позволяет улучшить её санитарные качества, исключить передачу условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (в том числе М. gallisepticum) при искусственном осеменении, прервать одно из звеньев эпизоотической цепи распространения респираторного микоплазмоза, а также повысить оплодотворённость и выводимость яиц, вывод молодняка, получить здоровое жизнеспособное потомство.
На «Способ санации спермы петухов» подана заявка на изобретение (приоритет от 03.09.2008, № заявки 2008135809).