Лабораторная диагностика: Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС)


Лабораторная диагностика: Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС)

Какие методы лабораторной диагностики я использую для диагностирования РРСС? Какой из методов я выберу в зависимости от ситуации? Как интерпретировать результат?

Доступные анализы



Схема выявления вируса и антител после контакта с РРСС: Данный график показывает изменения концентрации (ось Y) во времени (ось Х) различных аналитов, используемых при анализе. После контакта с РРСС вы обнаружите вирус в крови свиней (виремия), что обычно длится примерно от 2 до 4 недель, в зависимости от возраста и иммунного статуса свиней. Сероконверсия (обнаружение антител) обычно появляется в период 7-10 дней после контакта и длится несколько месяцев, затем животное становится серонегативным. Нейтрализация антител появляется в период от 4 до 6 недель после контакта (López и Osorio, 2004).

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

* Обнаруживает наличие определенной последовательности вирулентной нуклеиновой кислоты (РНК).
* Типы образцов: ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости, и т.д.

Преимущества:
- Одновременное использование различных праймеров для выявления РРСС типа 1 (европейский) и типа 2 (североамериканский) в одном образце.
- Очень высокая чувствительность (может выявить малейшее количество вируса).
- Раннее выявление – острые формы заболевания должны быть положительными.
- Использование множества различных видов образцов (ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости и т.д.).
Умеренная стоимость:
- Зачастую можно объединить 5 образцов сыворотки и ткани для снижения стоимости и минимизации потери чувствительности.
- Часто не объединяют ротовые жидкости из-за ожидаемых высоких пороговых значений (пониженная концентрация вируса), что может привести к существенному снижению чувствительности.

Недостатки:
* Во избежание ложно негативных результатов лаборатории должны периодически обновлять праймеры.
* Необходимо обновлять праймеры как для РРСС типа 1, так и типа 2.
* Для дифференциации вакцинного и дикого вируса необходимо секвенирование.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

* Обнаруживает наличие антител.
* Типы образцов: сыворотка и ротовые жидкости (для некоторых наборов).

Преимущества:
- Большинство наборов выявляют антитела как для РРСС типа 1, так и типа 2.
- Животные остаются положительными в течение нескольких месяцев (3-12).
- Могут использоваться при хроническом заболевании.

Недостатки:
- Выявление специфических антител и время выявления могут немного варьироваться в зависимости от доступных коммерческих наборов.
- Для того, чтобы животные стали серопозитивными требуется 7-10 дней.
- Невозможно определить разницу между материнскими антителами и контактными.
- Невозможно дифференцировать вакцинный и дикий вирус.

Иммуногистохимия (ИГХ)

* Выявляет наличие вирусного антигена
* Типы образцов: ткани

Преимущества:
- Выявляет вирус в месте поражения (хорошее доказательств причинно-следственной связи).
- Может выявить низкую, среднюю или высокую концентрацию вируса.

Недостатки:
- Необходимо предоставить корректный образец ткани.
- По сравнению с ПЦР для выявления необходимо большее количество вируса
- Оценивает только маленький образец ткани.

Генетическое секвенирование

* Секвенирует генетические нуклеиновые кислоты вируса (РНК).
* Типы образцов: ткани, кровь, сыворотка, ротовые жидкости и т.д.

Преимущества:
- Могут дифференцировать вакцинный и дикий вирус.
- Может помочь дифференцировать новый появившийся вирус от существующего или прошлых вирусов.

Недостатки:
- Дорогой.
- Обычно секвенирует только ORF5, т.е. 600 из примерно 15 000 основных пар.
- Образцы с высоким пороговым значением (> 34) сложнее секвенировать.

Таблица 1. Успешное секвенирование, основанное на методе расчета пороговых значений цикла ПЦР для РРСС из образца ротовых жидкостей. Таблица подготовлена Chris Rademacher и др. 2016.



Косвенная иммунофлюоресценция (ИФА)

* Выявляет наличие антител.
* Типы образцов: сыворотка.

Преимущества:
- Наравне с ПЦР может выступать в качестве подтверждающего теста для неожиданных положительных результатов ИФА.

Диаграмма показывает использование косвенной иммунофлюоресценции для подтверждения РРСС в образцах, неожиданно показавших положительный результат при анализе с помощью ИФА теста. Подозреваемый отрицательный образец, который при анализе ИФА дает негативный результат, считается отрицательным. Если образец неожиданно положительный, то можно провести подтверждающий тест с помощью косвенной иммунофлюоресценции. Если этот тест показывает положительный результат, то образец считается положительным. Если он отрицательный, можно считать, что это был ложно-положительный результат, а так как ПЦР также отрицателен, поэтому инфекция не подтверждается.

Недостатки:
- Невозможно для большого количества образцов.
- На результат влияет изолят вируса, использованный для анализа.
- Надежность в большой степени зависит от технических навыков.

Интерпретация результатов

ПЦР

Положительный – Вирус присутствует/циркулирует, что с высокой степени вероятности говорит о причинно-следственной связи, особенно при низких пороговых значениях и наличии клинических признаков. Недавняя вакцинация модифицированной живой вакциной может привести к положительным ПЦР результатам.

Отрицательный – отсутствие вируса или отрицательный результат при наличии вируса, если тестирование проводится по прошествии большого количества времени после заражения.

ИФА

Положительный – Материнские антитела или контакт в прошлом (обычно> 7-10 дней после контакта) с вакцинным или диким вирусом.

Отрицательный – отсутствие вируса или для выявления прошло слишком мало времени после инфицирования (обычно должно пройти 7-10 дней после контакта).

ИГХ

Положительный – вирус присутствует в месте поражения.

Отрицательный – отсутствие вируса либо отрицательный результат при наличии вируса, если тест проводится по прошествии большого количества времени после заражения.

Генетическое секвенирование

Вакцинный вирус – ожидаемая гомология - > 99%.
Дикий вирус – ожидаемая гомология снижается на 1-2% в год.

ИФА

Положительный - Материнские антитела или контакт в прошлом (обычно> 7-10 после контакта) с вакцинным или диким вирусом.

Негативный - отсутствие вируса или для выявления прошло слишком мало времени после инфицирования (обычно должно пройти 7-10 дней после контакта).

Сценарии

Аборты у свиноматок/свинок

* Абортированные плоды: Соберите 6-8 плодов и проведите общий ПЦР анализ. Только около 50% абортированных плодов будут ПЦР-положительными (поэтому необходимо провести анализ большого количества плодов), но у положительных образцов обнаружится высокая концентрация вируса, поэтому их можно объединять в группы по 10 для ПЦР анализа.

* Абортирующие свиноматки/свинки: Соберите сыворотку свиноматок/свинок, у которых недавно случился аборт (< 10 дней) для ПЦР анализа. Можно объединить в группы по 5. ИФА-анализ будет бесполезен, так как обычно для того, чтобы стать серопозитивными наивным свиноматкам/свинкам требуется 7-9 дней.

Репродуктивные проблемы у свиноматок/свинок

* Соберите 15-20 образцов от животных с репродуктивными проблемами и 15-20 от животных, у которых данные проблемы отсутствуют и протестируйте с помощью ПЦР (можно объединить 5-6 образцов) или ИФА (каждый по отдельности).

Слабые поросята при опоросе

* Можно собрать семейные ротовые жидкости от слабых поросят нескольких пометов и протестировать с помощью ПЦР.

* Можно собрать тестикулы (если кастрируются), хвосты, ткани языка (мертвые поросята) от поросят из различных пометов. Для тестирования можно объединять большое количество образцов.

* Соберите образцы сыворотки от 10 пораженных пометов отобрав 2-3 поросенка из помета и протестируйте с помощью ПЦР, объединив 5-6 поросят. Убедитесь, что поросята не вакцинировались против РРСС.

Поросята на доращивании с острыми клиническими признаками РРСС

* Соберите ротовые жидкости с 4-6 различных станков и протестируйте индивидуально с помощью ПЦР. Не объединяйте образцы для тестирования.

* Соберите 15-30 рандомных образцов сыворотки от поросят с клиническими признаками и протестируйте с помощью ПЦР. Для анализа можно объединить в группы по 5-6.

Поросята на доращивании с хроническими признаками РРСС

* Соберите ротовые жидкости с 4-6 различных станков и протестируйте индивидуально с помощью ПЦР. Не объединяйте образцы для тестирования. Можно также использовать ИФА-анализ.

* Соберите 30 рандомных образцов сыворотки от поросят с клиническими признаками и протестируйте с помощью ПЦР. Для анализа можно объединить в группы по 5-6. Для подтверждения контакта можно использовать индивидуальное тестирование образцов с помощью ИФА-анализа.


Автор: Alejandro Ramirez
Источник: pig333.ru
22.03.2021
1309

Статьи партнеров

А.Б. Гущева-Митропольская, Технический специалист ООО «Эвоник Химия» Н.А. Дзядзько, Технический специалист Evonik Operations GmbH По материалам AMINOTec, Edition 1, Novembe...

22.04.2021
2167

В. А. Афанасенко, технический специалист по птицеводству компании Каргилл Прибыль может и не единственная, но точно неизменная цель любого бизнеса, в том числе и в мясном ...

20.04.2021
2172

Микотоксины являются одними из наиболее важных стрессовых факторов, вызываемых кормлением, которые влияют на продуктивность птицы. Негативные последствия от микотоксикозов весьма...

31.03.2021
2235

Доктор Сюзанна Ротштейн (Dr. Susanne Rothstein), Biochem В современном производстве яиц основное внимание уделяется повышению продуктивности птицы и обеспечению производства...

25.03.2021
5099

Майк Хинрих, компания Biochem, Германия Одна из основных проблем в кормопроизводстве — загрязнение растительного сырья (в поле или при хранении) плесневыми грибами и их мета...

23.03.2021
9768

Технический специалист по птицеводству ООО Провими (Каргилл) Навицкий Андрей Владимирович Многие специалисты  птицефабрик сталкиваются с отставанием в росте и низкой ...

16.02.2021
2738

Бернард ЛАНДВЕР, доктор, старший специалист по кормлению животных Компания Biochem, Германия. Незаменимые микроэлементы, такие как Zn, Mn, Cu и Fe, участвуют в широком спе...

01.02.2021
2583

Зевакова В.К., руководитель технического отдела по птицеводству, ООО «Провими» (Каргилл). Выращивание птицы без антибиотиков - это одна из основных задач российского птице...

28.01.2021
2814

Рубен КРЕСПО, Бастиан ХИЛЬДЕБРАНД, доктор наук Компания Biochem, Германия В последние десятилетия в кормлении сельскохозяйственных животных и птицы широко применяют различ...

28.01.2021
2477

Кристоф Боствиронуа (Christophe Bostvironnois), менеджер по глобальным продуктам Жан-Кристоф Боден (Jean-Christophe Bodin), технический менеджер по продукции Джон Шлейфер (Jo...

14.01.2021
2533

Брылин А.П. к.в.н., генеральный директор ГК ПРОВЕТ Обеспечение биологической безопасности продукции птицеводства – вопрос, имеющий первостепенное значение как для европейс...

17.11.2020
3544