Сравнение серологических методов лабораторной диагностики лейкоза КРС


Сравнение серологических методов лабораторной диагностики лейкоза КРС

Михайлова Вера Владимировна1, Лобова Татьяна Петровна2, Скворцова Анастасия Николаевна3, Шишкина Мария Сергеевна4, Глушакова Наталья Анатольевна5

1. заведующая отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: cnmvl@сnmvl.ru.
2. старший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: t.lobova@mail.ru.
3. младший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: nefedovi5748@gmail.com.
4. младший научный сотрудник отдела вирусологии, ФГБУ ЦНМВЛ, email: M.belyaeva@rambler.ru.
5. технический директор ВерумБио, email: cto@verumbio.ru.

Хотите получить скидку 5% на продукцию компании IDEXX? 
Звоните по телефонам: +7 (800) 500 3585 или +7 (495) 120 7787 и назовите код скидки – ВЕРУМБИО321 KM
Акция действительна до 30 июня 2021 года.


Аннотация

В данной статье представлена сравнительная характеристика серологических методов лабораторной диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота. Была проведена оценка нескольких коммерческих тест – систем ИФА по критериям специфичности, чувствительности и воспроизводимости с использованием референтных образцов, соответствующих стандартам OIE (МЭБ).

Введение

Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) до сих пор является актуальной проблемой в молочном скотоводстве. Ущерб, наносимый заболеванием, обусловлен не только гибелью высокопродуктивных животных и утилизацией туш с генерализованными поражениями, затратами на лабораторные исследования, мероприятия по профилактике и ликвидации этого заболевания, но и достаточно высокими экономическими потерями в племенной работе. Помимо этого, сокращаются эксплуатационные сроки КРС, падают удои, качество молока, растет себестоимость продукции [1].

По требованиям Международного эпизоотического бюро, инфицированные вирусом лейкоза и гематологически больные животные, молоко, мясо и другие продукты убоя полученные от них, не могут находится в обороте и использоваться для пищевых целей на территории Таможенного союза и стран - участниц ВТО.

В настоящее время еще не разработано специфической профилактики против ВЛКРС [2]. Поэтому необходимо в краткие сроки выявлять заболевших животных, а также вирусоносителей, для того чтобы эффективно проводить противолейкозные мероприятия.

На сегодняшний день в лабораторной практике наиболее распространенным методом диагностики ВЛКРС является РИД – эта реакция основана на обнаружении в сыворотке крови специфических преципитирующих АТ, которые появляются в крови через 2-8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно. Реакция иммунодиффузии имеет свои преимущества: обладает достаточно высокой специфичностью и небольшой стоимостью реагентов, но она же имеет и ряд недостатков:

- более низкая чувствительность в сравнении с ИФА (т.е. возможны пропуски положительных животных) [4];
- визуальный учет результатов (возможна субъективная оценка);
- учет результатов только через 48 часов после постановки реакции.

В настоящий момент, кроме реакции иммунодиффузии наиболее часто используется метод непрямого ИФА. Метод основан на связывании специфических к вирусу лейкоза АТ с АГ ВЛКРС, комплекс АТ-АГ выявляется с помощью видоспецифических антител, меченых пероксидазой хрена, с последующим ферментативным превращением бесцветного субстрата в окрашенный продукт [3]. Результат можно получить в течении нескольких часов, оценка результатов осуществляется с помощью спектрометрического оборудования. Положительные результаты серологических исследований на обнаружение антител к ВЛКРС (ИФА, РИД) достаточны, для того чтобы стадо получило статус инфицированного вирусом лейкоза, но не стоит исключать гематологические исследования для выявления стадии клинического поражения крови при данном заболевании.

Материалы и методы

На базе ФГБУ ЦНМВЛ были проведены сличительные испытания трех коммерческих наборов ИФА, которые предназначены для выявления ВЛКРС: Leukosis serum screening Ab test Kit (IDEXX), ID Screen BLV Competition (IDvet), Набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Вариант 2) VeriTest (ООО «Ветбиохим») и Набора для серологической диагностики лейкоза КРС методом РИД (ФКП Курская Биофабрика, БИОК). Испытания были проведены и проанализированы в соответствии с инструкциями производителей. В качестве исследуемого материала для оценки чувствительности использовали референтную сыворотку Enzootic Bovine Leukosis (EBL) OIE Reference Serum E05. Для оценки специфичности была использована стандартная эмбриональная телячья сыворотка Hyclone (US Origin).

Для тестирования были использованы в пяти повторах разведения сыворотки Enzootic Bovine Leukosis (EBL) OIE Reference Serum E05: 1:10 (Европейский Союз требует обнаружения антител в стандартной сыворотке E05 в разведении 1/10 только после этого тест - системы могут быть лицензированы для диагностических целей (Всемирная Ассамблея МЭБ, 2016)), 1:100, и 1:1000.

Были получены следующие результаты:

Таблица №1



Выводы

Как мы видим, из таблицы №1 при исследовании цельного референтного контроля Enzootic Bovine Leu-kosis (EBL) OIE Reference Serum E05, все наборы ИФА и РИД дали положительный результат. При разведении в соотношении 10-1 наборы IDEXX, «Ветбиохим» и РИД, дали положительный результат. В 1 пробе при использовании набора IDVet был получен отрицательный результат, что и сказалось на повышении коэффициента вариации. Но уже при разведении референтного контроля в соотношении 1:100, положительный результат при исследовании всех образцов был получен только на наборе IDEXX, у набора IDvet была 1 сомнительная проба; при исследовании методом РИД было получено 2 отрицательных и 3 сомнительных результата, набор производства «Ветбиохим» – показал отрицательные результаты по всем исследуемым образцам. 

Из выше перечисленного можно сделать вывод, что при исследовании набором производства IDEXX, который обладает более высокой чувствительностью, выявление животных, имеющих антитела к ВЛКРС  будет осуществляться в гораздо более ранние сроки после заражения. 

При исследовании фетальной сыворотки Hyclone в пяти повторах, все используемые в опыте тест – системы дали отрицательный результат, что свидетельствует о высоком уровне специфичности данных наборов. 

Из сказанного выше можно сделать вывод, что при выявлении антител к ВЛКРС, наиболее чувствительной коммерческой тест – системой оказалась IDEXX Leukosis serum screening Ab test Kit. Для выбора метода исследования необходимо руководствоваться в первую очередь чувствительностью и специфичностью тест-систем, так как оздоровление поголовья КРС от лейкоза является одной из приоритетных государственных программ. Нужно улучшать ресурсы лабораторий, их оснащенность оборудованием и квалификацию специалистов. Но, необходимо обязательно учитывать и результаты гематологических исследований, серологически положительно реагирующих животных, чтобы дать достоверную оценку статуса стада и своевременно выявлять наличие заболевания.


Список используемой литературы

1. Fenner, F., E. J. Dubovi and N. J. Maclachlan.// Fenner's Veterinary Virolo-gy. 4th ed.Academic-2011-С.264.
2. Sabrina M. Rodríguez,1 Arnaud Florins,2 Nicolas Gillet,1 Alix de Brogniez,2 María Teresa Sánchez-Alcaraz,2 Mathieu Boxus,2 Fanny Boulanger,1 Gerónimo Gutiérrez,3 Karina Trono,3 Irene Alvarez,3 Lucas Vagnoni,3 and Luc Willems1,2,* //Preventive and Therapeutic Strategies for Bovine Leukemia Virus: Lessons for HTLV// Viruses. 2011 Jul; 3(7): 1210–1248.
3. Руководитель Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации М.В. КРАВЧУК 23 августа 2000 г. № 13-7-2/2130 МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.
4. Martin D., Arjona A., Soto I., Barquero N., Viana M., Gómez-Lucia E.: Compara-tive study of PCR as a direct assay and ELISA and AGID as indirect assays for the detection of bovine leukaemia virus. J Vet Med B 2001,48, 97–106.

07.05.2021
2122

Статьи партнеров

Д-р Бернхард Ландвер, старший специалист по кормлению компании Biochem Бетаин (триметиглицин) обычно используется в качестве альтернативного донора метильных групп для зам...

24.05.2021
9235

Дэвид Харрингтон, руководитель отдела птицеводства, Delacon Biotechnik GmbH, Австрия. www.delacon.com [ http://www.delacon.com ] С ростом населения планеты возрастает и п...

13.05.2021
7196

А.Б. Гущева-Митропольская, Технический специалист ООО «Эвоник Химия» Н.А. Дзядзько, Технический специалист Evonik Operations GmbH По материалам AMINOTec, Edition 1, Novembe...

22.04.2021
10108

В. А. Афанасенко, технический специалист по птицеводству компании Каргилл Прибыль может и не единственная, но точно неизменная цель любого бизнеса, в том числе и в мясном ...

20.04.2021
9355

Микотоксины являются одними из наиболее важных стрессовых факторов, вызываемых кормлением, которые влияют на продуктивность птицы. Негативные последствия от микотоксикозов весьма...

31.03.2021
9414

Доктор Сюзанна Ротштейн (Dr. Susanne Rothstein), Biochem В современном производстве яиц основное внимание уделяется повышению продуктивности птицы и обеспечению производства...

25.03.2021
14839

Майк Хинрих, компания Biochem, Германия Одна из основных проблем в кормопроизводстве — загрязнение растительного сырья (в поле или при хранении) плесневыми грибами и их мета...

23.03.2021
22391

Технический специалист по птицеводству ООО Провими (Каргилл) Навицкий Андрей Владимирович Многие специалисты  птицефабрик сталкиваются с отставанием в росте и низкой ...

16.02.2021
9928

Бернард ЛАНДВЕР, доктор, старший специалист по кормлению животных Компания Biochem, Германия. Незаменимые микроэлементы, такие как Zn, Mn, Cu и Fe, участвуют в широком спе...

01.02.2021
9715

Зевакова В.К., руководитель технического отдела по птицеводству, ООО «Провими» (Каргилл). Выращивание птицы без антибиотиков - это одна из основных задач российского птице...

28.01.2021
9993

Рубен КРЕСПО, Бастиан ХИЛЬДЕБРАНД, доктор наук Компания Biochem, Германия В последние десятилетия в кормлении сельскохозяйственных животных и птицы широко применяют различ...

28.01.2021
10058