Беляева С.Н., к.б.н.
ФГБОУ ВПО БелГСХА им. В.Я.Горина, г. Белгород, Россия
Аннотация: Цель исследования состояла в изучении механизма действия и эффективности применения 0,01%-ного раствора тимогена при коррекции иммунодефицитных состояний цыплят-бройлеров в процессе выращивания. Полученные данные: иммунологические, биохимические, серологические и гистологические, подтверждают эффективность иммуномодулятора за счет активизации процессов метаболизма и повышения резистентности цыплят. Поэтому рекомендуется применять 0,01% р-р тимогена (глутамил– триптофан) цыплятам-бройлерам перорально, начиная с 15-го дня выращивания, в дозе 0,1 мл/гол раствора в течение 7 дней, что позволит увеличить сохранность поголовья на 4,3% и продуктивность птиц на 86-90 грамм.
Ключевые слова:
генетический потенциал птицы, иммунокорректор тимоген (глутамин-триптофан), иммуномодуляция, иммунная система цыплят-бройлеров; сохранность и резистентность птицы.
В настоящее время, в промышленном птицеводстве остаются актуальными следующие задачи: производство экологически чистой продукции и изыскание новых подходов профилактики иммунодефицитных состояний цыплят-бройлеров, решение которых позволит максимально полно использовать их генетический потенциал и добиться выпуска доброкачественной безопасной продукции мяса-птицы. Актуальность проблемы восстановления иммунологических нарушений с помощью иммунокорригирующих препаратов крайне важна, особенно для цыплят-бройлеров, у которых проявляется высокая частота смешанных иммунодефицитных состояний [1, 2, 5, 9, 13], поэтому исследования, направленные на применение новых препаратов иммуномодулирующего действия, будут способствовать повышению сохранности поголовья и продуктивности птицы.
С этой целью был испытан синтетический иммуномодулятор – тимоген. Тимоген – дипептид, биологическое действие которого обусловлено, входящими в его состав аминокислотами – глутаминовая кислота и триптофан. Препарат разработан ЗАО МБНПК ≪Цитомед≫ г. Санкт-Петербург и прошел испытания на различных видах сельскохозяйственных животных [8].
Целью исследования было изучение механизма действия и обоснование эффективности применения биокорректора тимогена при иммунодепрессивных состояний у цыплят-бройлеров, направленных на активизацию адаптационно-метаболических процессов и защитно-приспособительных реакций, в процессе их промышленного выращивания.
Материал и методы исследования
Объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса ≪Росс-508≫ и ≪Хаббард F-15≫ в течение всего цикла выращивания, подобранные по принципу пар-аналогов в группы. Исследования проходили в два этапа: в лабораторных и производственных условиях.
Первый (физиологический) эксперимент выполнялся на базе Вроцлавского университета наук о жизни и окружающей среде, Польша (Wroclaw University of Environmental and Life Sciences, Poland).
Целью лабораторного опыта было изучение иммунологического и биохимического гомеостаза у птиц и определение способа применения 0,01% раствора тимогена. Методом проточной цитофлуориметрии определяли иммунофенотипирование клеток периферической крови и лимфоидных органов (тимуса, бурсы и селезенки) – количество Т - и В-лимфоцитов (экспрессирующих поверхностные рецепторы СD3 и СD19), а также субпопуляции Т-лимфоцитов (ТСR, CD4 и CD8) на цитометре FACS Calibur фирмы ≪Веcton Dickiinson≫ США c программным обеспечением Cell Quest. Содержание отдельных видов лейкоцитов определяли путем подсчета лейкограмм мазков крови с помощью микроскопа для морфологических исследований ≪Микмед-1≫ ОАО ≪Ломо≫ [10,12]. Общий белок –на универсальном спектрофотометре ВioTek с помощью набора реактивовирмы Sigma-Aldrich.
Вторая часть работы выполнялась в производственных условиях птицефабрики ООО ≪Лопанское≫ Белгородского агрохолдинга ≪БЭЗРК-Белгранкорм≫ Белгородской области на 58200 цыплятах-бройлерах кросса ≪Нubbard F-15≫, из которых были сформированы две группы по принципу пар-аналогов: опытная (29200 гол.) и контрольная (29000 гол.). Условия содержания (напольное выращивание) и кормление (гранулированный комбикорм по ГОСТ Р 51851-2001) были идентичными.
В опытной группе цыплятам-бройлерам применяли методом выпойки 0,01% раствора тимогена в дозе 0,1 мл/гол/сут в течение 7 дней, с 15-х по 21-е сутки откорма, дополнительно к основным лечебно-профилактическим мероприятиям установленных в хозяйстве. В контрольной группе тимоген не применяли. Учетный период продолжалсядо конца откорма.
Гистологическое исследование органов иммуногенеза —тимуса, фабрициевой сумки и селезенки —проводили после декапитации птицы, на 42-е сутки, учитывая отправные критерии, разработанные для определения иммуносупрессии и иммунодефицитов у птицы, по общепринятым методам [6, 7]. Серологические исследования на напряженность иммунитета цыплят к болезни Ньюкасла проводили на 15-е, 26-е, 35-е и 42-е сутки в РТГА. Фагоцитарную активность псевдоэозинофилов крови цыплят (на 26-е, 35-е и 42-е сутки) определяли постановкой опсоно-фагоцитарной реакции в условиях in vitro.
В качестве тест культуры для ОФР использовали E. Coli. Полученный материал был обработан методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента на ПЭВМ с использованием пакета программ Microsoft Office 2003.
Результаты исследований
В ходе экспериментальной части работы были получены положительные результаты,на основании которых была выбрана оптимальная схема введения пептидного биорегулятора. Так, цитофлуориметрическая оценка уровня лимфоцитов в крови птицы (65-85% Т- и 15-35% В-лимфоцитов) показала, что функциональная активность клеточного иммунитета в разные периоды онтогенеза была выше у цыплят, которым применяли 0,01% раствор тимогена: выше на 9-40% регуляторный индекс (CD4/CD8); количество Т-лимфоцитов на 13,70-100%, а его корецептор ТСR на 20-50% от соответствующих индексов у контрольных групп [3].
Это согласуются с данными по уровню протеинового обмена цыплят. Так, у Iк группы (общий контроль) количество общего белка имело тенденцию к достоверному увеличению с 5-х по 25-е сутки: с 17 г/л до 34 г/л, после чего его концентрация в крови оставалась неизменной –33,22 и 33,65 г/л. У опытных групп наблюдалась иная закономерность: достоверное увеличение концентрации белка прослеживалась до конца откорма, что подтверждает более динамичное развитие птицы в этих группах. К 42 суткам выращивания разница между контролем (33,65Ѓ}2,26 г⁄л) и опытными группами имела следующие значения: для II группы была выше на 14% (38 г⁄л); III – 20% при р<0,05 (40 г⁄л) и IV – 11% (37 г⁄л).
Сопоставляя данные по функциональному состоянию иммунной системы птиц и массе иммунокомпетентных органов можно сделать вывод, что вес тимуса коррелирует с содержанием Т-лимфоцитов в крови, а масса бурсы с количеством В-лимфоцитов и иммуноглобулинов, так как при увеличении у опытных цыплят массы данных органов отмечается увеличение количества Т- и В-лимфоцитов и иммуноглобулинов.
Так, на 15 сутки исследований, масса центральных и периферических органов иммунитета была выше во II опытной группе, где применяли внутримышечно тимоген в дозе 0,1 мл/кг массы тела по сравнению, как с дополнительным контролем, так и с основным. На 25 сутки, через 10 дней после введения тимогена, лучшие были показатели у IV группы, которой препарат вводили перорально, с 15-х суток в дозе 0,1 мл/гол – тимус увеличен в 2 раза, бурса на 62%, селезенка на 39%, а на 42 сутки, в конце выращивания птицы , лучшие значения наблюдались в III группе, где тимоген применяли в/м с 15-х суток в дозе 0,1мл/кг массы тела – масса тимуса увеличена на 69%, бурса на 71%. селезенка на 5%.
Таким образом, на основании полученных иммунно-биохимических показателей крови и иммунокомпетентных органов цыплят, была выработана наиболее рациональная схема применения 0,01% раствора дипептида в условиях промышленного птицеводства, и в последующем апробирована на птице фабрике в составе лечебно-профилактических мероприятий – с 15-х по 21-е сутки выращивания, в течение 7 дней, методом выпаивания в дозе 0,1 мл/гол. птицы.
Проведенные нами гистологические исследования иммунокомпетентных органов (тимуса, бурсы и селезенки) цыплят-бройлеров в производственных условиях позволили выяснить иммунологический статус поголовья – определить уровень иммунодефицитного состояния птицы и биостимулирующее действие иммунокорректора тимогена.
Наши исследования совпадают с исследователями других авторов, которые установили, что более тяжелые иммунодефицитные состояния развиваются сначала в фабрициевой сумке, затем тимусе и селезенке [6, 11].
Выявленные иммуноморфологические изменения в первичных и вторичных лимфоидных органах цыплят позволили установить у цыплят контрольной группы патологическое состояние соответствующее иммунодефицитному состоянию третьей степени. Известно, что иммунодефициты третьей степени обратимы, тогда как восстановление нарушенныхфункций органа с четвертой и пятой степенью иммунодефицита имеет необратимый характер [6]. Цыплята-бройлеры, которым применяли 0,01% раствор тимогена методомвыпаивания в дозе 0,1 мл/гол. с 15-х по 21-е сутки выращивания, имели нормальное морфофункциональное развитие органов иммуногенеза. [4].
Глутамил-триптофановый комплекс препарата тимогена также способствовал повышению неспецифических клеточных факторов защиты организма – фагоцитарная активность псевдоэозинофилов была достоверно выше в опытной группе на 15,18% на 42-е сутки исследования.
Фагоцитарное число было достоверно выше на 27,68% (35-е сутки) и 31,32% (42-е) в отличие от контрольной группы. Серологические исследования в РТГА по напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни у цыплят-бройлеров кросса «Hubbard F-15» на птицефабрике подтвердили биокорригирующее (положительное) влияние тимогена на формирование адекватного антителогенеза вакцинированной птицы – 85% групповой иммунитет, который обеспечивает защиту привитой птицы от развития симптомов болезни. Иная картина складывалась в контрольной группе цыплят, где коэффициент разброса титров антител был значителен от 1:8 до 1:4096, что привело к формированию разнородного иммунного статуса. К концу откорма, сохранность поголовья повысиласьна 4,3% и составила в опытной группе 95,3% по сравнению с контролем, где сохранность была 91%. Живая масса также была выше в контрольной группе на 86-90 грамм.
Полученные данные по иммунологическим, серологическим, биохимическим, гистологическим исследованиям и продуктивным показателям цыплят свидетельствуют о биокорригирующем влияние глутамил-триптофанового комплекса препарата тимогена на адаптационно-биохимические процессы цыплят-бройлеров в процессе их выращивания.
Это, очевидно, обусловлено полифункциональностью пептидов, входящих в тимоген (триптофана и глутаминовой кислоты) и каскадным механизмом реализации биологических эффектов в организме, через систему многочисленных пептидных мессенджеров [8].
Заключение
Применение средств, модулирующих иммунный ответ, является приоритетным направлением в птицеводстве. Данный препарат является экологически чистыми и оказывает максимальное физиологическое воздействие на организм птицы путем формирования компенсаторно-приспособительных реакций в ответ на стресс и нарушения
гомеостаза, что подтверждают следующие исследования:
• иммунологические по функциональной активности клеточного и гуморального звена иммунитета; биохимические подтверждают нормализующее влияние дипептида на уровень протеинового питания, коррелируя с массой тела птицы;
• гистологические по степени морфофункционального развития центральных и периферических органов иммуногенеза цыплят – бурсы, тимуса и селезенки;
• продуктивные показатели согласуются с полученными данными комплексного исследования организма, указывающих на активизацию обмена веществ, положительно влияя на приросты массы тела у птиц – увеличивая их на 4,3-5,0% (86-90 г) к концу откорма и повышая сохранность цыплят на 4,3% по сравнению с контрольной группой.
Таким образом, применение 0,01% раствора тимогена методом выпаивания цыплятам-бройлерам в дозе 0,1 мл/гол/сут в течение 7дней, с 15 суток откорма, является достаточно эффективным средством для профилактики иммунодефицитных состояний цыплят-бройлеров в промышленном птицеводстве. Препарат может быть рекомендован для включения в программу промышленного откорма цыплят.
